Благодаря реализации нацпроекта «Наука» в ННЦМБ ДВО РАН сформирована уникальная, высококлассная и максимально полная приборная база, что даёт возможность нашим учёным вести исследования на переднем крае науки и публиковать результаты в ведущих мировых изданиях. 

Одним из наиболее значимых приобретений 2020 года стал Клеточный сортер Sony MA900 – это старшая модель линейки сортеров от компании Sony.

Сортировка клеток - это процесс, при котором исследователь разделяет полученную гетерогенную суспензию клеток (живых или предварительно зафиксированных) на подтипы (субпопуляции), отличающиеся по своим специфическим параметрам: размер клетки, степень грануляции цитоплазмы (наличие светорассеивающих компонентов внутри клетки), наличие (или отсутствие) внутри клетки или на её поверхности специфических маркёров, окрашенных флуоресцентными красителями, антителами и т.д. Все эти параметры можно комбинировать или исключать при поиске нужной субпопуляции клеток. На выходе учёный-исследователь получает чистые гомогенные по заданным параметрам популяции клеток, которые можно использовать в дальнейших экспериментах. Для сортировки клеток используют клеточные сортеры – проточные цитофлуориметры, в которых, после измерения параметров индивидуальной клетки, она не отправляется в канистру для отходов, а «помечается» в приборе электрическим зарядом и может быть отсортирована от других клеток, не обладающих необходимыми параметрами, в отдельную пробирку или планшет.

Первый прототип клеточного сортера был изобретён учёными Стэндфордского Университета ещё в 1968 году (Flow cytometry and cell sorting /Andreas Radbruch (ed.). 2ed. Berlin: Springer, Cop. 2000. XXIII, 355 с.: (Springer lab manual); ISBN 3-540-65630-8 (Springer lab manual) / Цитология - Жизненный цикл клетки и ее репродукция - Дифференциация клеток - Методика и техника научно-исследовательской работы - Биологические методы – Сборник цитометрия, метод). Это было на тот момент технически сложное устройство, как для запуска и предварительной калибровки, так и для использования. Существующие современные модели клеточных сортеров, пусть и гораздо сложнее в техническом плане, но (чаще всего) много проще в эксплуатации.

Новый высокопроизводительный прибор в ННЦМБ ДВО РАН характеризуется следующими техническими преимуществами:

  • наличие 4-х лазеров (488 нм, 405 нм, 561 нм и 638 нм), обеспечивающих измерение до 14-ти оптических параметров (12 флуоресцентных и 2 – светорассеяния) каждой проходящей через измерительную ячейку клетки;
  • одновременная сортировка в 4 пробирки, либо в планшеты от 6 до 384 лунок;
  • высокий уровень автоматизации запуска, предварительной настройки, калибровки, контроля качества сортировки и асептической очистки;
  • возможность сортировки объектов разного размера (от хромосом до крупных клеток) за счёт конструкции прибора со сменными сортировочными чипами с различным диаметром сопла (от 75 до 130 мкм).

Дооснащение уже имеющегося в коллективном пользовании на базе Лаборатории клеточных технологий Программно-аппаратного комплекса для клеточного и молекулярно-генетического анализа на базе цитофлюориметра CytoFLEX существенно расширяет спектр возможностей исследований. Ежедневное обслуживание и помощь при работе обеспечивает Андрей Викторович Борода.

Благодаря высокой эффективности и производительности нового прибора научная группа решает ряд задач по:

  • получению чистых клоновых культур клеток морских одноклеточных водорослей, содержащих необходимые автофлуоресцирующие пигменты или липидные гранулы с потенциальными биотехнологическими целями;
  • очистке от дебриса и выделению гомогенных субпопуляций клеток из первичных гетерогенных клеточных культур морских беспозвоночных животных;
  • изоляции и увеличению доли («насыщения») минорных (менее 1% от общего количества клеток в суспензии) субпопуляций клеток, таких как плюрипотентные стволовые или генетически ре-программированные постоянные линии клеток морских животных для биохимических исследований и целей клеточной биологии;
  • разделению клеток «хозяина» и симбионта при изучении симбиотических морских организмов, например, кораллов;
  • получению единичных клеток (Single Cell Sorting) из различных тканей морских организмов для проведения секвенирования ДНК и РНК одиночных клеток;
  • многопараметрическому анализу и выделению субпопуляций клеток морских организмов, с различными сочетаниями специфических флуоресцентных маркёров.

По словам старшего научного сотрудника Лаборатории клеточных технологий ННЦМБ ДВО РАН Андрея Бороды, комплекс позволит благодаря выделению чистых подтипов клеток с необходимыми параметрами добиться качественно новых и на порядок более достоверных результатов экспериментов, которых невозможно добиться без физической сортировки клеток.

 

 


Информацию подготовили с.н.с. Борода А.В. и н.с. Требухова Ю.А.